Klíčový rozdíl - průtoková cytometrie vs. FACS

V kontextu buněčné teorie jsou buňky základní strukturální a funkční jednotkou všech živých organismů. Třídění buněk je metodologie, která se používá k oddělení různých buněk podle fyziologických a morfologických znaků. Mohou mít intracelulární nebo extracelulární vlastnosti. Interakce DNA, RNA a proteinů jsou považovány za intracelulární interaktivní vlastnosti, zatímco tvar, velikost a různé povrchové proteiny jsou považovány za extracelulární vlastnosti. V moderní vědě vedly metodologie třídění buněk k pomoci různým výzkumům v biologických studiích a také při zavádění nových principů prostřednictvím výzkumu medicíny. Třídění buněk se provádí na různých metodikách, které zahrnují jak primitivní s menším vybavením, tak pokročilé technologické metodologie s využitím sofistikovaných strojů. Mezi hlavní použité metodiky patří průtoková cytometrie, fluorescenčně aktivované třídění buněk (FACS), výběr magnetických buněk a třídění jednotlivých buněk. Průtoková cytometrie a FACS jsou vyvinuty pro diferenciaci buněk podle jejich optických vlastností. FACS je specializovaný typ průtokové cytometrie. Průtoková cytometrie je metodologie, která se používá při analýze heterogenní populace buněk podle různých molekul buněčného povrchu, velikosti a objemu, což umožňuje zkoumání jednotlivých buněk. FACS je proces, kterým se směs vzorků buněk rozděluje podle jejich rozptylu světla a fluorescenčních charakteristik do dvou nebo více nádob. Toto je klíčový rozdíl mezi průtokovou cytometrií a FACS.

OBSAH

1. Přehled a klíčový rozdíl 2. Co je průtoková cytometrie 3. Co je FACS 4. Podobnosti mezi průtokovou cytometrií a FACS 5. Porovnání bok po boku - průtoková cytometrie vs. FACS v tabulkové podobě 6. Shrnutí

Co je to průtoková cytometrie?

Průtoková cytometrie je metoda, která se používá ke zkoumání a stanovení exprese intracelulárních molekul a buněčného povrchu ak definování a charakterizaci různých typů buněk. Používá se také při určování objemu buněk a velikosti buněk a při hodnocení čistoty izolovaných subpopulací. To umožňuje víceparametrové vyhodnocení jednotlivých buněk přibližně ve stejnou dobu. Průtoková cytometrie se používá k měření intenzity fluorescence, která je produkována fluorescenčně značenými protilátkami, které pomáhají identifikovat proteiny nebo ligandy, které se vážou na přidružené buňky.

Obecně průtoková cytometrie zahrnuje hlavně tři dílčí systémy. Jsou to tekutina, elektronika a optika. V průtokové cytometrii je k dispozici pět hlavních složek, které se používají při třídění buněk. Jedná se o průtokovou buňku (proud kapaliny, který se používá k jejich transportu a zarovnání buněk pro proces optického snímání), systém měření (může být z různých systémů včetně rtuti a xenonových výbojek, vysoce výkonného vodou chlazeného nebo vzduchem chlazené lasery nebo diodové lasery), ADC; Analog-Digital Converter systém, zesilovací systém a počítač pro analýzu. Získání je proces, kterým jsou data shromažďována ze vzorků pomocí průtokového cytometru. Tento proces je zprostředkován počítačem, který je spojen s průtokovým cytometrem. Software přítomný v počítači analyzuje informace přiváděné do počítače z průtokového cytometru. Software má také schopnost upravit parametry experimentu, který řídí průtokový cytometr.

Co je FACS?

V souvislosti s průtokovou cytometrií je fluorescenčně aktivované třídění buněk (FACS) metodou, která se používá při diferenciaci a třídění vzorku směsi biologických buněk. Buňky jsou odděleny od dvou nebo více nádob. Metoda třídění je založena na fyzických vlastnostech buňky, která zahrnuje rozptyl světla a fluorescenční charakteristiky buňky. Toto je důležitá vědecká technika, kterou lze využít k získání spolehlivých kvantitativních a kvalitativních výsledků fluorescenčních signálů, které jsou emitovány z každé buňky. Během FACS, zpočátku, předem získaná směs buněk; suspenze je směrována do středu úzkého proudu kapaliny, který rychle teče. Tok kapaliny je navržen tak, aby oddělil buňky v suspenzi na základě průměru každé buňky. Na proud suspenze se aplikuje vibrační mechanismus, který vede k tvorbě jednotlivých kapiček.

Systém je kalibrován za účelem vytvoření jediné kapičky s jednou buňkou. Těsně před tvorbou kapiček se průtoková suspenze pohybuje podél zařízení pro měření fluorescence, které detekuje fluorescenční charakteristiku každé buňky. V místě vzniku kapiček je umístěn elektrický nabíjecí prstenec, který je před měřením intenzity fluorescence indukován nábojem. Jakmile jsou kapičky vytvořeny z proudu suspenze, je uvnitř kapiček zachycen náboj, který poté vstupuje do elektrostatického vychylovacího systému. Podle náboje systém odkloní kapičky do různých kontejnerů. Způsob aplikace náboje se liší podle různých systémů používaných ve FACS. Zařízení používané v FACS je známé jako třídič buněk aktivovaný fluorescencí.

Jaká je podobnost mezi průtokovou cytometrií a FACS?


  • Průtoková cytometrie a FACS jsou vyvinuty pro diferenciaci buněk podle jejich optických vlastností.

Jaký je rozdíl mezi průtokovou cytometrií a FACS?

Shrnutí - průtoková cytometrie vs. FACS

Buňka je základní strukturální a funkční jednotkou všech živých organismů. Třídění buněk je proces, kterým jsou buňky izolovány a diferencovány do různých kategorií na základě jejich intracelulárních a extracelulárních vlastností. Průtoková cytometrie a FACS jsou dvě důležité metodologie při třídění buněk. Oba procesy jsou vyvinuty pro rozlišení buněk podle jejich optických vlastností. Průtoková cytometrie je metodologie, která se používá při analýze heterogenní populace buněk podle různých molekul buněčného povrchu, velikosti a objemu, což umožňuje zkoumání jednotlivých buněk. FACS je proces, kterým se směs vzorků buněk rozděluje podle jejich rozptylu světla a fluorescenčních charakteristik do dvou nebo více nádob. Toto je rozdíl mezi Flow Cytometry a FACS.

Stáhněte si PDF verzi Flow Cytometry vs FACS

Můžete si stáhnout PDF verzi tohoto článku a použít ji pro účely offline podle citace. Stáhněte si PDF verzi zde Rozdíl mezi průtokovou cytometrií a FACS

Odkaz:

  1. Průtoková cytometrie (FCM) / FACS | Fluorescenčně aktivované třídění buněk (FACS). Přístup k 22. září 2017. K dispozici zde Ibrahim, Sherrif F. a Ger van den Engh. "Průtoková cytometrie a třídění buněk." SpringerLink, Springer, Berlín, Heidelberg, 1. ledna 1970.. Přístup k 22. září 2017. K dispozici zde

Obrázek se svolením:


  1. 'Cytometer'By Kierano - vlastní práce, (CC BY 3.0) prostřednictvím Commons Wikimedia' Fluorescence Assisted Cell Sorting (FACS) B'By SariSabban - Sabban, Sari (2011) Vývoj modelového systému in vitro pro studium interakce Equus caballus IgE s jeho vysokoafinitním receptorem FcεRI (disertační práce), University of Sheffield, (CC BY-SA 3.0) přes Commons Wikimedia